當(dāng)您的色譜柱出現(xiàn)異常，您知道其中的原因和預(yù)防方案嗎？

今天小編就為您帶來一份色譜柱的維修報告，讓我們一起來看看反相液相色譜柱的常見污染現(xiàn)象，查找其中的原由，并學(xué)習(xí)多種可行的預(yù)防方案。

柱壓變高，柱效變低，出峰峰形異常等。

1、中藥類樣品成分復(fù)雜，如前處理方式不當(dāng)，則容易引起強(qiáng)保留成分積留在色譜柱入口端，導(dǎo)致色譜柱壓力升高，柱效下降，峰形異常，或在色譜圖中出現(xiàn)“鬼峰”。

2、蛋白類樣品積累：生物類樣品易在柱頭累積，導(dǎo)致柱壓升高，柱效下降。

3、其他：如膠狀、絮狀等樣品通過過濾無法去除，也會積壓在篩板和柱頭端，引起柱壓升高。

4、流動相一次配置使用超過12小時變質(zhì)，生成的絮狀物導(dǎo)致色譜柱的污染。

1、中藥等成分復(fù)雜的樣品：開發(fā)合適的前處理方法，采用SPE小柱、萃取等方法，減少樣品溶液中的易污染成分。

2、蛋白類樣品的積累：定期進(jìn)行色譜柱的沖洗維護(hù)，推薦使用乙腈-水-三氟乙酸（50:50:0.1）作為洗脫試劑，低流速過夜沖洗。

3、其他：如膠狀、絮狀等樣品無法通過過濾去除，從而污染柱篩板和柱頭的情況，建議更好在樣品處理或方法工藝上去優(yōu)化解決。

4、使用保護(hù)柱，且在保護(hù)柱能力下降后，要及時地更換新的保護(hù)柱芯。柱壓升高>10%；柱效下降>10%；分離度下降>10%，均是需要更換保護(hù)柱芯的信號。

5、對于檢測復(fù)雜樣品的色譜柱，建議定期按色譜柱說明書的異常再生方法進(jìn)行色譜柱的再生維護(hù)，目的是定期去除柱頭的強(qiáng)保留污染物質(zhì)。

6、12小時更長不超過24小時更換流動相以及儲液瓶。

02 填料板結(jié)

1、柱壓升高，柱效低，峰形拖尾或前延等現(xiàn)象。

2、色譜柱填料板結(jié)，打開色譜柱后，會發(fā)現(xiàn)，填料顏色不變，但填料成片狀、塊狀、結(jié)晶等結(jié)塊現(xiàn)象。

1、流動相配置時間過長，流動相長菌，或乙腈等有機(jī)相長時間放置產(chǎn)生絮狀沉淀。

2、如上述填料污染的原因中，樣品成分復(fù)雜，容易被柱頭端填料吸附，特別如樣品中含有蛋白類物質(zhì)，在柱頭端填料進(jìn)行富集，則易導(dǎo)致填料污染板結(jié)。

3、其他：如膠狀、絮狀等樣品通過過濾無法去除，樣品進(jìn)入色譜柱后積壓在篩板和柱頭端。

1、流動相按需配置，純水流動相一次配置使用不超過24小時，其他含有有機(jī)相流動相一次使用不超過3天。

2、檢測復(fù)雜樣品的色譜柱污染預(yù)防方案，可參見上文一中的填料污染預(yù)防。

03 填料塌陷

一般會出現(xiàn)柱壓高，柱效低，峰形拖尾或前延，出峰漂移等。此類損傷的色譜柱，異常再生或維修一般無法改善。

1、除了特殊說明，硅膠基質(zhì)的色譜柱的長期使用pH范圍是2-8，流動相或樣品溶液的pH較高或較低，均會加快鍵合相的脫落和硅膠的破碎。

2、柱溫較高，加快了緩沖鹽對硅膠基質(zhì)的攻擊，導(dǎo)致鍵合相脫落和填料塌陷。

3、小基團(tuán)鍵合相，本身的性質(zhì)較易脫落，是屬于正常的填料性質(zhì)表現(xiàn)的現(xiàn)象。

4、長期在高壓條件下使用色譜柱等。

● 避免鍵合相脫落

1、樣品溶液和流動相的pH控制在長期適宜的使用范圍內(nèi)，樣品溶液pH異常，使用保護(hù)柱，或者更換月旭LP（耐受pH≤2）系列或Xtimate 系列（耐受pH≥8）。

2、根據(jù)色譜柱的鍵合相性質(zhì)，選擇合適的試劑作為流動相。如非極性鍵合相，避免使用非極性溶劑；中級性鍵合相，避免使用中等極性溶劑；極性鍵合相，避免使用極性溶劑。

3、參考月旭液相色譜柱說明書中的存儲條件。

● 避免基質(zhì)破碎

1、除特殊說明，硅膠基質(zhì)色譜柱使用的流動相和樣品溶液pH不超過8。

2、按照色譜柱說明書，選擇適宜的柱溫，避免高溫。

3、避免壓力脈沖，高壓等。

需要注意，月旭的反相液相色譜柱一般建議正向使用，反接沖洗。但對于已經(jīng)存在填料塌陷的色譜柱，不建議反接沖洗色譜柱，以免對色譜柱造成進(jìn)一步的損傷。

一般會出現(xiàn)柱壓高，柱效低，峰形拖尾等。

1、使用的過濾膜材質(zhì)不對或質(zhì)量不好，引入了新的物質(zhì)到流動相或樣品中，導(dǎo)致篩板和填料污染。

2、儀器系統(tǒng)長時間未經(jīng)過徹底清洗。

3、流動相中的緩沖鹽和離子對試劑使用前后沒有過渡和有效的沖洗，析出，堵塞篩板和填料。

4、在梯度使用的過程中，有機(jī)相比例高于60%，變換速率過快，有緩沖鹽析出。

5、不當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸引起的顆粒物脫落等堵塞篩板。

1、更換更加耐受、質(zhì)量更好的過濾器材（請參考月旭微信公眾號中關(guān)于過濾材質(zhì)選擇的文章）。

2、泵后清洗溶劑和洗針溶劑定期更換，建議一周更換一次，儀器系統(tǒng)定期使用40度溫水，有機(jī)溶劑等徹底清洗。

3、色譜柱使用前后用過渡流動相過渡掉系統(tǒng)中高有機(jī)溶劑或者高鹽相（參考月旭液相色譜柱說明書中新柱活化項下方法）。

4、減緩流動相的變化速率，降低更高有機(jī)相的比例。

5、新柱子嚴(yán)格按照說明書活化后使用，如活化時發(fā)現(xiàn)壓力偏高，說明運(yùn)輸及保存過程中色譜柱保存溶液有損失，此時宜選用低流速過夜的方式活化色譜柱。如低流速過夜活化色譜柱后，壓力依然偏高，則可能是不當(dāng)運(yùn)輸引起了篩板堵塞，需要聯(lián)系廠家寄回維修排查。