很多時(shí)候，實(shí)驗(yàn)室的小伙伴們都是參照標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可標(biāo)準(zhǔn)上一句“以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”就足夠讓小伙伴們選擇困難癥犯，更不用說(shuō)是自己做方法開(kāi)發(fā)的實(shí)驗(yàn)了。的確，色譜是一門實(shí)驗(yàn)學(xué)科，沒(méi)有誰(shuí)能在未做實(shí)驗(yàn)的情況下預(yù)測(cè)出哪一根色譜柱能完成分離任務(wù)，尤其是當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有明確推薦色譜柱品牌型號(hào)的時(shí)候，這也就導(dǎo)致很多小伙伴經(jīng)常內(nèi)心OS：C18柱那么多，哪個(gè)才能分的更好？

別急，雖然我們不能準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但把握基本的色譜柱性能參數(shù)還是可以做到的。下面就聽(tīng)小編細(xì)細(xì)道來(lái)。

眾所周知，反相C18在當(dāng)今色譜分離領(lǐng)域依舊承擔(dān)著極大比例的分離任務(wù)，就是因?yàn)槠湫再|(zhì)適合大多數(shù)化合物的色譜分離，那么在選擇色譜柱的時(shí)候，就一定要注意色譜柱本身的適用性，盡可能選擇普適性強(qiáng)，適用面廣的色譜柱，而C18柱的“載碳量”這一參數(shù)，就是尤為重要的參數(shù)之一。

對(duì)于一根普適性強(qiáng)的C18色譜柱，載碳量參數(shù)Z好是在10%~20%之間，尤以20%附近Z佳（16%-22%），因?yàn)檫@樣比例略高的載碳量，在保證了化合物能有效保留的前提下，活性位點(diǎn)數(shù)量減小，出現(xiàn)殘留吸附的情況也會(huì)減小。另外，稍高于普通C18的鍵合密度也有助于色譜鍵合相選擇性的提高。

除了特殊情況以外，越是適用性強(qiáng)的填料越要選擇B型硅膠。B型硅膠的硅膠純度＞99.999%，金屬離子含量＜10 ppm，并且孔徑和粒徑分布更加均勻，這樣得到的色譜峰展寬更小，峰形更加對(duì)稱。

可能很多小伙伴都會(huì)有意無(wú)意地忽略掉色譜柱的比表面積這個(gè)參數(shù)，其實(shí)這也是影響色譜柱性能的一個(gè)很重要的參數(shù)。比表面積的大小，將影響到鍵合相覆蓋率的高低，以及目標(biāo)物與鍵合相發(fā)成相互作用的概率大小。比表面積的大小，還會(huì)影響梯度平衡時(shí)間的長(zhǎng)短。那么，在選擇普適性強(qiáng)的色譜柱的時(shí)候，盡可能選擇比表面積在180m2/g~450m2/g的色譜柱，像常見(jiàn)的320m2/g，350m2/g，420m2/g，450m2/g，都是適用面比較廣的。

孔徑的選擇取決于分子量的大小。一般來(lái)說(shuō)，要求孔徑是分子直徑三倍以上，這樣分子才能順利進(jìn)入孔中有所保留。以分子量2000為界，分子量＜2000，可以選擇100?、120?、150?等孔徑；分子量＞2000，如多肽，核酸等大分子的分離，可以選擇300?，甚至孔徑更大的色譜填料。

如果標(biāo)準(zhǔn)上有指定具體的色譜柱規(guī)格，那無(wú)需多言。但當(dāng)我們自己在做方法開(kāi)發(fā)的時(shí)候，無(wú)從得知什么規(guī)格更合適，而柱長(zhǎng)、內(nèi)徑、粒徑的不同又會(huì)影響到柱效、分離度、保留時(shí)間等系統(tǒng)適用性值，選擇的不合適還可能造成色譜柱壓力過(guò)高或污染。因此，保險(xiǎn)起見(jiàn)，小伙伴們一開(kāi)始可以選擇4.6×250mm，5μm的色譜填料，這樣5μm粒徑柱壓不會(huì)很高，也便于沖洗維護(hù)；柱長(zhǎng)夠長(zhǎng)，多組分樣品也具有一定的分離效率；柱內(nèi)徑也不至于太小而造成超載。

特殊基團(tuán)一般是指為了使得色譜填料具有獨(dú)特的特性和不一樣的選擇性，從而在色譜柱的鍵合工藝或封尾工藝過(guò)程中，添加的特殊官能團(tuán)試劑。這些試劑的加入固然有助于分離一些本不易分離的組分，但是，在進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)，或方法建立初期，不建議選擇添加特殊基團(tuán)的色譜柱，否則色譜分離的重現(xiàn)性可能在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中成為潛在的問(wèn)題。

怎么樣，通過(guò)上述的介紹，小伙伴是不是現(xiàn)在對(duì)色譜柱的參數(shù)有了更全面的認(rèn)識(shí)了呢，以后在選擇色譜柱的時(shí)候也會(huì)更有方向感，不會(huì)再如“霧里看花”一般不知如何選擇了吧。