G-10為軟凝膠填料，機械強度自然不如硅膠填料那么強，因此在使用過程中，應(yīng)極力避免流動相或樣品中含有有機溶劑，否則柱床極易塌陷。若使用一段時間后出現(xiàn)問題，如峰形和分離度下降，則可以按照說明書，用蒸餾水重新活化柱子，沖洗時間可以久一點，然后用流動相低流速平衡過夜；若無明顯改善，則可按照說明書的再生沖洗方法進(jìn)行沖洗，再生沖洗步驟見下文。

若以上操作均無明顯改善，則更有可能的情況下是填料出現(xiàn)嚴(yán)重污染，甚至是填料塌陷，此情況下再進(jìn)行沖洗的意義不大，建議客戶重新采購新的色譜柱。

G-10色譜柱再生沖洗：

1、0.5mol/L NaOH 和 0.5mol/L NaCl，1:1混合(v/v)，沖洗20-30倍柱體積；

2、用蒸餾水沖洗色譜柱直至中性；

3、按照藥典方法檢測葡聚糖2000對照品系統(tǒng)適用性試驗；

SEC

SEC填料為親水球狀蛋白硅膠，常用作高分子聚合物的分子量排阻分離。處理方式類似G-10，有問題了也是重新活化，用純水沖洗長時間，然后流動相平衡；若無明顯改善，就按照說明書上的異常沖洗方式?jīng)_洗，沖洗方式見下文。至于分離度方面，如果分離度下降，可以通過調(diào)節(jié)流速來增大分離度。

SEC色譜柱異常沖洗步驟：

1、低pH的高濃度中性鹽（如0.5M硫酸鈉溶液，硫酸調(diào)pH 3.0）沖洗15倍柱體積，有助于移除堿性蛋白；

2、含有機溶劑（如10%-20%的甲醇、乙腈）的緩沖鹽溶液（如50mM磷酸鹽緩沖液，pH 7.0）沖洗15倍柱體積，有助于沖洗掉疏水蛋白；

3、加入助溶劑有助于除去固定相上強吸附的物質(zhì)（如通過氫鍵作用吸附等）；

4、按照色譜柱測試報告的進(jìn)樣條件進(jìn)對照品測試柱效；

硅膠柱（SiO2）在正相模式下常見的問題通常都是由于平衡不夠，或未充分過渡，或含水造成的。正相色譜中水分含量是影響保留和選擇性的重要參數(shù)。大部分溶劑都會內(nèi)含極少部分的溶解水分（如正己烷20℃下水分含量是0.0111% w/w）。正相色譜中常見的分離度、保留時間漂移等問題，可以歸因于固定相和流動相中水分的變化，而填料可能還是完好的。

建議使用以下方法：

1、1OO%異丙醇--1OO%甲醇--1OO%異丙醇，注意異丙醇充分過渡（異丙醇粘度大，壓力高，注意調(diào)整流速在合適的范圍內(nèi)），然后流動相平衡過夜；

2、去除固定相上的水分，用含2.5%二甲氧基丙烷，和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積；

3、使用半飽和流動相，將無水的非極性流動相分成兩半，其中一半加入一定量的水，并混勻攪拌一小時，靜置分層后，將水相除去，再將兩部分非極性溶劑混合在一起，就配成了“半飽和流動相”（方法2和方法3 二選其一）；

4、按照空進(jìn)樣--空白溶劑--對照品--供試品的順序進(jìn)樣，看出峰情況；

氨基柱是常見的正相、反相均可使用的色譜柱之一。正相使用的時候氨基柱的處理維護(hù)方式同硅膠柱；

反相使用下，尤其是做糖類項目的時候，易出現(xiàn)峰展寬、拖尾、壽命等問題。首先需要明白的是，氨基柱鍵合的氨丙基團(tuán)，本身就比常規(guī)的C18、C8等反相基團(tuán)易水解，因此在使用氨基柱時，就要做好使用壽命比常規(guī)色譜柱短的心理準(zhǔn)備（具體介紹可參考月旭公眾號推文：問君幾多愁，恰似一支氨基柱超難留!

若出現(xiàn)上述的問題，建議：

1、1OO%乙腈--1OO%甲醇--1OO%異丙醇--1OO%乙腈，各項沖洗40min以上（異丙醇粘度大，壓力高，注意調(diào)整流速在合適的范圍內(nèi)）；

2、按照方法1沖洗后，流動相平衡過夜，必要時需打底進(jìn)樣；

3、若還是無明顯改善，就用純甲醇，1.0mL/min流速，正沖3小時以上，然后流動相和溶劑、樣品全部新配，再用新配的流動相平衡1小時，按照空進(jìn)樣--空白溶劑--對照品--供試品的順序進(jìn)樣；

4、如果經(jīng)過上述處理還不滿足，那更有可能是使用過程中硅膠基質(zhì)破碎導(dǎo)致的，此時若繼續(xù)沖洗費時費溶劑，且改善意義不大，建議直接采購新的色譜柱（具體可參見月旭公眾號推文：乳糖檢測注意事項

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